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慢病毒包装相关辅助质粒 – 知乎 New Update

现在的慢病毒包装系统通常包括几个质粒,这几个质粒上分别含有慢病毒复制的成分,这样做的目的就是为了增加安全性,毕竟如果只用一个成分的话,危险系数很高,人一旦接触这种病毒就有可能遇到危险。而把这几个成分…

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现 的 慢 装 装 装 装 常 常 括 括 别 装 慢 慢 几 个 括 括 别 别 慢 慢 几 几 个 个 别 别 别 慢 慢 几 个 个 的 别 别 别 慢 慢 几 复 的 的 别 别 别 慢 慢 就 复 个 的 别 别 别 慢 慢 就 复 个 括 慢 别 别 慢 慢 慢 几 个 括 上 别 别 慢 慢 慢 几 的 括 别 别,接触 这种 病毒 就有 可能 遇到 危险

而 把这 几个 成分 分散 在 几个 质粒 中, 很难 在 体外 形成 危险 的 病毒 颗粒

第二 代 慢 病毒 包装 系统 含有 3 个 质粒, 第三 代 慢病毒包装系统含有4个质粒。这两代病毒包装系统都含有以下相同的成分:.第 第 编码 蛋 蛋 或 或 目 目 基 转 转 转 质 其 其 就 是 你 你 其 其 其 其 也 是 是 你 你 常 做 做 也 是 是 常 常 常 常 做 做 做 就 是 是 常 常 常 需 做 做 做 也 是 是 常 常 需 两 做 做 做 的) , LTR 就 就 是 辅 辅 目 插 插 插 插 到 到 宿 宿 的 组 组 许 到 宿 宿 宿 的 组 组 许 许 慢 宿 毒 粒 粒 是 基 基 许 慢 毒 毒 质 粒 的 的 基 于 慢 慢 毒 粒 粒 的 的 的 安 安 慢 慢 毒 质 毒 毒 的 的 为了 安 安 慢 毒 毒 毒毒Self-inactivating (SIN), 装 装 装, 装 装 结构 结构 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 会 装 装 装 装 装 装 会 组 组 组 组 组 组 组 组 组 装 组 组 装 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 组 会 组 组 组 组 组 会 组 会 组 组 组, LTR for LTR for 慢病毒利用病毒的LTR第二大慢病毒.下图是第二代慢病毒系统:.这个 这个 统 个 个 个 个 个 个, 装 个 个: 装装 质粒, 它 编码 GAG, POI, REV 与 TAT

The secondary grains: 包 包 包,,,质 ps ps 的 的 的 的 ps ps ps ps ps ps 图 图 图 图 图 图 ps ps 图 内 启 启 图 图 否则 这 个 个 内 内 启 启 启 启, LTR Tat依.第三慢病毒.第三慢病毒如下所示:

3rd generation analysis, 3rd generation analysis, 3rd generation analysis, 3rd generation analysis, 2nd generation analysis, 3rd generation analysis, 3rd generation analysis, 3rd generation analysis安 安 安 了, 但 但 的 的 率 了 了 了 此 此 之 之 之 外 了 了 此 此 此 之 之 外 外 删 删 删 此 此 之 之 之 却 毒 删 删 此 此 之 之,的 的 并 并 赖 赖 赖 赖 赖 赖 赖 赖 赖 件 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 或 的 的 的 的 的 可 可 第 或 或 的 的 的 启 可 可 毒 或 或 的 的 的 启 可 可 第 毒 的 的 的 的 启 启 可 可 第 或

.区别:

Features Documentary 2nd Distinctive Disease The 3rd Diagnosis Tat 的 粒 被 被 被 被 被 被 被 目 目 目 被 被 被 被 被 可 可 可 和 可 毒 装 可 可 可 可 和 和 和 和 和 和 装 可 可 被 和 和 和 和 和 和 装 装 可 可 被 和 和 和)质粒:psPAX2) 2个质粒,一个编码gag、pol,另一个质粒编码rev,(也就是pMDlg/pRRE和pRSV-Rev) ) 可替换,通常用于编码VSV-G(质粒:pMD2.G) SIN) 使用 4 个 质粒 来 替代 慢 病毒 的 3 个 质粒 剔除 了 Tat 元件 LTR 病毒 启动 子 广泛 型 杂 合:.

删除 了 部分 5’LTR, 与 另外 一个 异 源 增强 子 / 启动 子 融合, 例如: CMV或RSV。

第三 代 病毒 包装 系统 的 过程 其实 买 的 目的 质粒 虽然 是 三代 病毒 包装 系统 的, 但是 完全 可以 用 二代 慢 病毒 包装 系统 来 替代, 用 PMD2G 和 psPAX2, 外加 目的 质粒 进行 转 染 病毒 产生 过程: 3-4个质粒共转到A293T细胞:1个包含有目的基因的转移质粒;1-2个包装质粒1个包膜质粒.包膜质粒:pMD2.G 前往下载最新质粒序列:Addgene: pMD2.G.二大包装质粒:psPAX2 前往下载最新质粒序列:Addgene: psPAX2

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Three generations:

pMDlg/pRRE 前往下载最新质粒序列: Addgene: pMDLg/pRRE

Addgene: pRSV-Rev

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Lentiviral Guide – Addgene New

3rd generation packaging systems: express gag and pol from one packaging plasmid and rev from another, such as pMDLg/pRRE and pRSV-Rev. 3rd generation packaging systems DO NOT express tat. Third generation lentiviral systems are considered safer than second generation systems, but may be more difficult to use because they require transfection …

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애드진의 패키징 및 엔벨로프 플라스미드는 일반화되어 다양한 세포 유형 및 시스템에 적합합니다

실험을 계획할 때 고려하고 최적화해야 하는 중요한 구성 요소는 전이 플라스미드입니다

2세대 렌티바이러스 플라스미드는 유전자 발현을 위해 바이러스 LTR 프로모터를 사용하는 반면, 3세대 전달 플라스미드는 하이브리드 LTR 프로모터를 사용합니다(자세한 내용은 아래 참조)

추가 또는 특수 프로모터가 또한 전달 플라스미드 내에 포함될 수 있습니다

예를 들어, U6 프로모터는 shRNA 발현을 구동하기 위해 pSico 플라스미드에 포함됩니다

전송 플라스미드에 포함될 수 있는 다른 기능은 다음과 같습니다

Tet 또는 Cre 기반 조절 및 형광 융합 또는 리포터

Addgene에서 구할 수 있는 lentivirus plasmid를 찾아보세요.

lentivirus의 안전성을 높이기 위해 바이러스 생산에 필요한 구성 요소가 여러 plasmid(2세대 시스템용 3개, 3세대 시스템용 4개)에 나누어져 있습니다

두 시스템의 구성 요소는 다음과 같습니다

오른쪽의 그래픽은 렌티바이러스 게놈이 어떻게 편집되어 2세대 렌티바이러스 시스템을 구성하는 3개의 플라스미드에 걸쳐 분포되는지 보여줍니다

이 시스템은 Gag, Pol, Rev 및 Tat 유전자를 인코딩하는 단일 패키징 플라스미드를 포함합니다

전달 플라스미드에는 바이러스 LTR과 psi 패키징 신호(사진에 없음)가 포함되어 있습니다

내부 프로모터가 제공되지 않는 한, 유전자 발현은 약한 프로모터이고 발현을 활성화하기 위해 Tat의 존재를 필요로 하는 5’LTR에 의해 구동됩니다

외피 단백질 Env(일반적으로 광범위한 감염성 때문에 VSV-G)는 세 번째 별도의 외피 플라스미드에 인코딩됩니다

모든 2세대 렌티바이러스 전달 플라스미드는 LTR의 이식유전자 발현이 Tat 의존적이기 때문에 2세대 패키징 시스템과 함께 사용해야 합니다

둘째, Tat는 이종에 융합된 키메라 5′ LTR의 추가를 통해 3세대 시스템에서 제거됩니다

전이 플라스미드의 프로모터

이 프로모터로부터의 이식유전자의 발현은 더 이상 Tat transactivation에 의존하지 않습니다

3세대 전이 플라스미드는 2세대 또는 3세대 패키징 시스템으로 패키징할 수 있습니다

2세대와 3세대 패키징 시스템의 주요 차이점을 비교하려면 아래 표를 참조하십시오

3세대 시스템은 몇 가지 주요 방식으로 2세대의 안전성을 더욱 향상시킵니다

먼저 패키징 시스템은 Rev를 인코딩하는 플라스미드와 Gag 및 Pol을 인코딩하는 플라스미드의 두 가지 플라스미드로 나뉩니다

이 시스템은 더 안전하지만 사용하기가 더 번거롭고 플라스미드 1개를 추가하기 때문에 바이러스 역가가 낮아질 수 있습니다

배지를 교체하고 짧은 배양 기간 후에 바이러스를 포함하는 상등액을 제거하고 저장하거나 원심분리하여 바이러스를 농축합니다

그런 다음 조악하거나 농축된 바이러스를 사용하여 관심 세포를 형질도입할 수 있습니다

바이러스 역가의 측정 및 자세한 내용은 Trono lab 웹사이트에서 제공되는 프로토콜을 참조하십시오.

감염성 형질전환 렌티바이러스를 생산하는 과정은 오른쪽의 간단한 도식에 요약되어 있습니다

3-4개의 플라스미드가 A293T 세포로 형질감염됩니다

렌티바이러스 플라스미드에 대한 자주 묻는 질문(FAQ)

2세대와 3세대 렌티바이러스 시스템의 차이점은 무엇입니까? 2세대 및 3세대 렌티바이러스에 대한 전체 설명은 위의 2세대 대 3세대를 검토하십시오

간단히 말해서, 2세대 렌티바이러스 시스템은 3세대 시스템보다 기능성 렌티바이러스 입자를 생성하기 위해 더 적은 수의 플라스미드에서 더 많은 HIV 단백질을 사용합니다

2세대 패키징 시스템: 단일 패키징에서 HIV gag, pol, rev 및 tat 유전자를 모두 표현합니다

psPAX2와 같은 플라스미드.

3세대 패키징 시스템: pMDLg/pRRE 및 pRSV-Rev와 같이 한 패키징 플라스미드에서 gag 및 pol을 표현하고 다른 패키징 플라스미드에서 rev를 표현합니다

3세대 패키징 시스템은 tat를 표현하지 않습니다

3세대 렌티바이러스 시스템은 2세대 시스템보다 안전한 것으로 간주되지만 기능성 렌티바이러스 입자를 생성하기 위해 4개의 개별 플라스미드로 형질주입해야 하기 때문에 사용이 더 어려울 수 있습니다

중요 : 3세대 전이 플라스미드는 2세대 시스템과 함께 사용할 수 있습니다

패키징 시스템이지만 2세대 트랜스퍼 플라스미드는 3세대 패키징 시스템과 함께 사용할 수 없습니다

렌티바이러스와 레트로바이러스의 차이점은 무엇인가요?

렌티바이러스는 레트로바이러스의 아형입니다

실험적 관점에서 렌티바이러스와 표준 레트로바이러스(γ-레트로바이러스)의 주요 차이점은 렌티바이러스는 비분할 및 활발히 분열하는 세포 유형을 감염시킬 수 있는 반면 표준 레트로바이러스는 유사분열 활성 세포 유형만 감염시킬 수 있다는 것입니다

이것은 렌티바이러스가 레트로바이러스보다 더 다양한 세포 유형을 감염시킬 수 있음을 의미합니다

렌티바이러스와 표준 레트로바이러스 모두 포장을 위해 gag, pol 및 env 유전자를 사용합니다

그러나 그들은 다른 바이러스이므로 이러한 포장 구성 요소의 약간 다른 동형을 사용합니다

따라서 렌티바이러스는 레트로바이러스 포장 시스템에 의해 효율적으로 포장되지 않을 수 있으며 그 반대의 경우도 마찬가지입니다

렌티바이러스 플라스미드를 복제하고 생산하는 데 어떤 박테리아 균주를 사용해야 합니까? 렌티바이러스 플라스미드에서 발견되는 긴 말단 반복으로 인해 Invitrogen Stbl3™ 또는 NEB Stable 세포와 같이 불안정한 영역의 상동 재조합 빈도를 줄이는 균주를 사용하는 것이 좋습니다

이렇게 하면 반복이 유지되고 종종 더 많은 DNA 수율을 얻을 수 있습니다

그러나 플라스미드에 ccdB 유전자가 포함된 Gateway 카세트가 포함되어 있으면 ccdB 생존 균주가 필요합니다

렌티바이러스를 생산하려면 어떤 세포주를 사용해야 합니까? 293T 세포는 일반적으로 렌티바이러스를 생산하는 데 사용됩니다

293T 세포주는 GenHunter에서 얻을 수 있습니다.

렌티바이러스 숙주 세포 범위(향성)를 결정하는 것은 무엇입니까? Lentiviral tropism은 바이러스 외피 단백질이 숙주 세포 표면의 수용체와 상호작용하는 능력에 의해 결정됩니다

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VSV-G 외피 단백질은 렌티바이러스 입자 생산에 일반적으로 사용되는데, 이는 다양한 종 및 세포 유형에 걸쳐 광범위한 친화성을 부여하기 때문입니다

자세한 내용은 Cronin, et al

다른 봉투와 그 친화성에 대한 기사

렌티바이러스를 사용하여 안정적인 세포주를 만드는 방법은 무엇입니까? 렌티바이러스는 표준 레트로바이러스와 동일한 방식으로 안정적인 세포주를 만드는 데 사용할 수 있습니다

즉, 많은 렌티바이러스 게놈에는 퓨로마이신 내성 유전자와 같은 선택 가능한 마커가 있어 감염된 숙주 세포에 항생제 내성을 부여합니다

이러한 항생제를 숙주 세포의 성장 배지에 첨가하면 렌티바이러스 게놈이 포함되지 않은 모든 세포를 죽이고 살아남은 세포를 확장하여 렌티바이러스 게놈을 포함하고 유전적 유전을 보유하는 안정적인 세포주를 생성할 수 있습니다

해당 게놈에 의해 암호화된 정보.

많은 렌티바이러스 전달 플라스미드에는 항생제에 대한 내성을 부여하는 선택 가능한 마커가 없지만 GFP와 같은 다른 마커를 인코딩합니다

연구원은 FACS를 사용하여 GFP를 발현하는 세포를 분류하고 나중에 이 세포를 세포주로 확장할 수 있습니다

렌티바이러스는 어디에 통합됩니까?

바이러스 통합에 대한 게놈 차원의 연구에 따르면 렌티바이러스는 가장 자주 활발하게 전사된 유전자에 통합되며 이러한 선호도는 표적 종 전반에 걸쳐 보존됩니다

염색질 가용성이 통합을 용이하게 하지만 전사된 유전자에 대한 렌티바이러스 선호도를 설명하지는 않습니다

렌티바이러스 HIV와 레트로바이러스 MMLV를 비교하는 연구는 바이러스 통합효소가 통합 사이트 선호도를 형성하는 데 역할을 한다는 것을 나타냅니다

주요 세포 결정자는 전사 단위에 사전 통합 복합체를 모집하고 통합을 촉진하는 렌티바이러스 테더링 단백질인 LEDGF/p75입니다

LEDGF/p75 결합 부위는 유전자 본체에 풍부하고 대부분 프로모터 및 유전자간 영역에 결여되어 있어 렌티바이러스 통합 패턴을 반영합니다

렌티바이러스 플라스미드를 바이러스를 만드는 것과 반대로 직접 형질감염에 사용할 수 있습니까? 일부(전부는 아님) 렌티바이러스 전달 플라스미드는 전이유전자의 발현을 달성하기 위해 일시적 형질감염에 사용될 수 있으며 주로 3세대 구성물일 수 있습니다

Lentiviral transfer plasmid는 일시적인 transfection을 위해 특별히 설계되지 않았습니다

따라서 렌티바이러스 LTR로 인해 이식유전자 발현이 제한될 수 있습니다

가능하지만 단순 형질감염을 위해 lentiviral transfer plasmids를 사용하는 것을 명시적으로 권장하지는 않습니다

shRNA 발현에 일반적으로 사용되는 lentiviral transfer plasmids에서 cDNA를 발현하는 것이 가능합니까? 네, 가능합니다

하지만 먼저 트랜스퍼 플라스미드 내의 프로모터를 수정해야 합니다

pLKO.1과 같은 대부분의 shRNA 발현 렌티바이러스 플라스미드는 shRNA의 RNA pol III 유도 전사를 유도하기 위해 U6 또는 H1 프로모터를 사용합니다

cDNA 발현에는 RNA pol II가 필요하므로 CMV 또는 RSV와 같은 RNA pol II 프로모터가 필요합니다.

하나의 제한 부위만 포함하는 렌티바이러스 플라스미드에 삽입물을 복제하는 데 사용할 수 있는 기술은 무엇입니까? 렌티바이러스 전달 플라스미드가 단일 제한 부위를 포함하는 경우 표준 복제 기술을 사용하여 삽입물을 이 부위에 결찰할 수 있습니다

부모 벡터에서 삽입물을 소화하고 복제하는 것이 즉시 가능하지 않은 경우 이 사이트를 사용하는 몇 가지 가능한 접근 방식에는 PCR을 사용하여 관심 삽입물에 호환 가능한 제한 부위를 서브클로닝하거나 추가하는 것이 포함됩니다

서브클로닝 과정은 모 벡터에서 관심 삽입물을 분해하고 삽입물이 나중에 이 새로운 벡터에서 분해되어 렌티바이러스 벡터로 복제될 수 있는 방식으로 두 번째 벡터로 연결하는 것으로 구성됩니다

이것은 기본적으로 관심 유전자가 궁극적으로 삽입물을 결찰하고자 하는 벡터의 것들과 양립할 수 있는 부위 옆에 있을 때까지 벡터 사이의 제한 부위를 뒤섞는 것입니다

종종 PCR을 사용하여 관심 삽입물에 제한 부위를 추가하는 것이 시간이 덜 걸리고 더 쉽습니다

이것은 필요한 제한 부위를 포함하는 프라이머를 사용하여 삽입 서열을 PCR 증폭함으로써 달성됩니다

기능적 제한 부위는 사용된 프라이머의 끝에서 특정 수의 염기여야 합니다

또는 별도의 벡터에서 다중 복제 부위(MCS)를 렌티바이러스 벡터의 단일 부위에 연결하고 더 유용한 제한 부위를 생성할 수 있습니다

MCS 복제 및 변경에 대한 자세한 내용은 Addgene의 플라스미드 참조 및 프로토콜 가이드를 참조하십시오

실행 가능한 제한 부위가 없지만 Gateway® 클로닝 시스템과 호환되는 전송 벡터에 삽입물을 어떻게 복제합니까? Gateway® 호환 벡터는 관심 삽입물을 포함하는 클론을 생성하기 위해 재조합을 사용합니다

간단히 말해서, 삽입물은 삽입물이 대상 벡터(이 경우 대상 벡터는 렌티바이러스 전달 벡터가 됨)와 재조합할 수 있도록 하는 서열(attP1 및 attP2라고 함)이 측면에 있는 영역에서 진입 벡터로 먼저 복제됩니다

대상 벡터는 attP 시퀀스가 ​​재결합하는 attB 시퀀스를 포함합니다

Gateway® 복제 시스템에 대한 자세한 내용은 Invitrogen 웹사이트를 참조하십시오.

렌티바이러스 벡터의 사용과 관련된 안전 문제는 무엇입니까? NIH에서 언급한 바와 같이 렌티바이러스 사용과 관련된 두 가지 주요 안전 문제는 다음과 같습니다

복제 가능 렌티바이러스 생성 가능성 종양 발생 가능성

복제 가능한 렌티바이러스의 생성 가능성은 벡터의 설계와 안전한 실험실 실습에 의해 해결됩니다

벡터 디자인 측면에서 Addgene에서 제공하는 2세대 및 3세대 렌티바이러스 시스템은 바이러스의 구성 요소를 서로 다른 벡터로 분리하여 전달, 봉투 및 포장합니다

전달 벡터는 관심 유전자를 인코딩하고 숙주 세포 게놈에 통합될 서열을 포함하지만 엔벨로프 및 패키징 벡터에 인코딩된 유전자 없이는 기능성 바이러스 입자를 생성할 수 없습니다

패키징, 엔벨로프 및 전달 벡터 간에 재조합이 발생하지 않고 생성된 구성물이 바이러스 입자로 패키징되지 않는 한, 이러한 시스템에서 정상적으로 생성된 바이러스가 초기 감염 후에 복제되어 더 많은 바이러스를 생성하는 것은 불가능합니다

이와 관련하여 3세대 시스템은 패키징 벡터가 2개의 개별 플라스미드로 분할되었기 때문에 2세대 시스템보다 안전한 것으로 간주됩니다(결과적으로 총 4개의 플라스미드 시스템이 생성됨)

또한, 3세대 시스템은 바이러스 생산 단계에서 전달 벡터로부터 전장 바이러스를 생산하기 위해 HIV 단백질 tat를 사용하지 않습니다.

Addgene에 기탁된 많은 렌티바이러스 전달 벡터는 자가 불활성화(SIN)입니다

벡터

이 벡터는 한 라운드의 역전사 후에 5’LTR로 전달되는 바이러스 게놈의 3’LTR에 결실이 있습니다

이 결실은 숙주 세포에 통합된 후 전장 바이러스의 전사를 폐지합니다

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종양 발생의 가능성은 주로 렌티바이러스 전달 벡터(종양유전자인지 여부에 따라 다름)에 포함된 특정 삽입물을 기반으로 합니다

사례별로 고려하십시오.

생물안전은 항상 수행되는 실험의 정확한 특성과 관련하여 고려되어야 하며 생물안전 사무소는 렌티바이러스 연구와 관련된 기관의 모범 사례에 대한 자세한 정보를 제공할 수 있습니다

NIH에는 렌티바이러스 안전성 고려사항에 대한 추가 정보가 있습니다.

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Director: William Arias
Camara: Hebert Lopez schonberger
Asistente de Producción: Sofia Arias
Producción general: William Arias
Grua: Nicolas Faria
Make UP: Natalia Medina
Produccion Ejecutiva: Tomas Talarico
Fotografía: Ezequiel Kramer
Dirección De Fotografía: Axel Acosta
Gaffer: Monogramuz
Asistentes: Jano Salazar/ Ignacio Llanes /Agustin Gullia
Color: JC Acosta
Barbería: Hugo Rodriguez
Catering: Javier Napolitano
Editor: Francisco Rogora
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Motos:
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Milagros Luz Vigo
Micaela Pallanch
Antonela Decaria
Romina Delgado
Macarena Rodriguez
Daniela Romero
Letra:
Omar… traé pa tomar
Alejo Isaak
Mueve las bombas como Nati Natasha
Tú te pasas la raya
Ella fuma tanto que se olvida la malla
Cuando sale sola viene y se arrebata
Y se viene conmigo porque yo le doy
Un p-rre-o, pa que lo suba, pa que lo baje
Quiebre cintura, que lo trabaje
Y ella quiere un p-rre-o
Pa que lo suba, pa que lo baje
Quiebre cintura, que lo trabaje
Ella es una psicópata la nena perrea cabrón y se me desacata
Cuando lo mueve hasta abajo mata
Se enloquece si saco la paka
Y yo como coscu mami te doy plaka plaka
Y yo que me pongo loquito, quiere con un menorcito
Y vo’ andá’ fumando fasito
Esto es un p-rre-o, de tus favoritos
A ella le gustan los cantantes y me le pego despacito
Mami yo soy turromantiko
Las mujeres ¿dónde están? Que estoy con el matatan
Pa tu guata blam blam rapa papa pampam
Siempre turro tranquila tranquila
También andamo rulay
Todas las turras ¿dónde están? Que ando con el matatán
Pa tu guata blam blam rapa papa pampam
Siempre de Adidas o de Nike
Mami te andamos rulay
Alejo Isaak
Es que caigo para el baile siempre rocho
Ando con mi gente siempre rocho
Para estar en casa siempre rocho
Salgo a la vereda siempre rocho
¿Dónde están las gatas que les gusta el perreo?
Mueven la burra hasta el suelo no lo pueden evitar
¿Dónde están los rochos que le dan al fumeteo?
Nosotros somos los villeros la vamos a re pinchar
Ella quiere un p-rre-o, pa la pista vámonos
Dale mami somos dos
El Kaleb a mi me llamó
Me dijo dale menor
Yo ando con dos moró, el tiempo se nos pasó
El tema ya pegó, en la clande coronó
Y yo delirando alcohol y re rocho para el col-mo
Alejo Isaak te suena y a tu guacha le retumba
Cuando yo la veo ella quiere un p-rre-o
Pa que lo suba, pa que lo baje
Quiebre cintura, que lo trabaje
Y ella quiere un p-rre-o
Pa que lo suba, pa que lo baje
Quiebre cintura, que lo trabaje
Y ella la toca toca al toque toque
Sube a la moto, se tira unos cortes
Baila apretadita agachadita hasta
Que el piso el culo toque
Sabe que yo soy el matatán tan tan
A su guacho yo le hago racatan tan tan
Ella agarra el celular y abre tik tok
Busca la mejor canción y ahí estoy yo
Ahora ponte en posición de p-rre-o
Y a la cuenta de 3 2
Una mano pa tra tiki tra tiki tra tiki tra tiki tra tiki tra
Y el culo va pa tra
Tiki tra tiki tra tiki tra tiki tra tiki
Una mano pa tra
Metele Metele Metele Metele Metele Metele Metele
TRA
Metele Metele Metele Metele Metele Metele Metele
Y el culo va pa tra
Metele Metele Metele Metele Metele Metele Metele
TRA
Cuando yo la veo ella quiere un p-rre-o
Pa que lo suba, pa que lo baje
Quiebre cintura, que lo trabaje
Y ella quiere un pe-rre-o
Pa que lo suba, pa que lo baje
Quiebre cintura, que lo trabaje
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